ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)沒(méi)有檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào)的原因?
可能原因有
①一抗和二抗不匹配
②沒(méi)有足夠的一抗和二抗來(lái)結(jié)合目標(biāo)蛋白
③封閉劑與一抗或二抗有交叉反應(yīng)
④一抗不識(shí)別待檢物種蛋白
⑤抗原量不足
⑥組織中目的蛋白含量低
⑦轉(zhuǎn)膜不充分
⑧洗膜過(guò)度
⑨過(guò)度封閉使目標(biāo)蛋白不能顯色
⑩一抗失效
相應(yīng)的處理辦法分別是
①保證二抗與一抗宿主物種相同(如一抗來(lái)自小鼠，二抗須為抗小鼠抗體)
②使用高濃度抗體，4℃延長(zhǎng)孵育時(shí)間(如過(guò)夜)
③使用溫和的去污劑如吐溫-20或更換封閉劑(脫脂奶粉、BSA、明膠等)
④參照況明書，比對(duì)免疫原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會(huì)發(fā)生反應(yīng)，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照
⑤保證每條泳道蛋白上樣量不低于20-30μg，使用蛋白酶抑制劑并設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照
⑥ 濃縮樣本使信號(hào)zui大化
⑦使用可逆染色劑如立春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜結(jié)果，檢查轉(zhuǎn)膜操作是否正確
⑧適度洗膜
⑨預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的封閉劑或縮短封閉時(shí)間
⑩使用新鮮抗體，重復(fù)使用有效濃度會(huì)降低?
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室
主營(yíng)產(chǎn)品：酶聯(lián)免疫試劑盒，食品農(nóng)殘檢測(cè)，細(xì)胞系，培養(yǎng)基，胎牛血清
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號(hào)：滬ICP備14033764號(hào)-3 總訪問(wèn)量：1259195 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸
